補體連接反應
⑴ 補體結合反應的反應特點
補體結合反應操作繁雜,且需十分細致,反應的各個因子的量必須有恰當的比回例。特別是補體和溶答血素的用量。補體的用量必須恰如其分,例如:抗原抗體呈特異性結合,吸附補體,本應不溶血,但因補體過多,多餘部分轉向溶血系統,發生溶血現象。又如抗原抗體為非特異性,抗原抗體不結合,不吸附補體,補體轉向溶血系統,應完全溶血,但由於補體過少,不能全溶,影響結果判定。故補體量必須恰如其分。溶血素量也有一定影響,例如陰性血清,應完全溶血,但溶血素量少,溶血不全,可被誤認為弱陽性。另外,這些因子的用量又與其活性有關:活性強,用量少;活性弱,用量多,故在本試驗之前,必須精確測定溶血素效價、溶血系統補體價、溶菌系統補體價等,測定其活性以確定用量。
⑵ 什麼是補體經典途徑
經典激活途徑
補體在溶菌或溶血反應時被激活的過程中,種成分可分為3個功能單位,即①識別單位:包括C1q、C1x、C1s;②活化單位:包括C2、C3、C4,③膜攻擊單位:包括C5、C6、C7、C8和C9。同一功能單位的補體成分彼此間有化學親和性,激活後可相互結合在一起,共同執行使細胞溶解這一生物學功能。因此,補體的經典激活途徑可分為識別、活化和膜攻擊3個階段。這3個階段一般在靶細胞膜的3個不同部位進行。補體在激活過程中C2、C3、C4、C5均分別裂解成2個或2個以上的片段,分別標以a、b等符號,如 C3a、C3b、C3c等。其中C2a、C3b、C4b、C5b直接或間接結合在靶細胞上,以固相的形式參與溶細胞過程,C3a、C5a游離在液相。補體在激活過程中, C5、C6、C7經活化後還可聚合成 C567.並與C3a、C5a一起發揮特殊的生物學功能。
參與補體經典激活途徑的成分包括C1-C9。按其在激活過程中的作用,人為地分成三組,即識別單位(Clq、Clr、Cls)、活化單位(C4、C2、C3)和膜攻擊單位(C5-C9),分別在激活的不同階段即識別階段、活化階段和膜功擊階段中發揮作用。
(一)識別階段
Clq:Clq分子有6個能與免疫球蛋白分子上的補體結合點相結合的部位。當兩個以上的結合部位與免疫球蛋白分子結合時,即Clq橋聯免疫球蛋白之後,才能激活後續的補體各成分IgG為單體,只有當其與抗原結合時,才能使兩個以上的IgG分子相互靠攏,提供兩個以上相鄰的補體結合點不能與Clq接觸,只有當IgM與抗原結合,發生構型改變,暴露出補體結合部位之後,才能與Clq結合。一個分子的IgM激活補體的能力大於IgG。Clq與補體結合點橋聯後,其構型發生改變,導致Clr和Cls的相繼活化。
Clr:Clr在C1大分子中起著連接Clq和Cls的作用。Clq啟動後可引起Clr構型的改變,在活性的Clr,後者可使Cls活化。
Cls:Clr使Cls的肽鏈裂解,其中一個片段Cls具有酯酶活化,即CI的活性。此酶活性可被C1INH滅活。
在經典途徑中,一旦形成Cls,即完成識別階段,並進入活化階段。
(二)活化階段
CI作用於後續的補體成分,至形成C3轉化酶(C42)和C5轉化酶(C423)的階段。
C4:C4是CI的底物。在Mg2 存在下,CI使C4裂解為C4a和C4b兩個片段,並使被結合的C4b迅速失去結合能力。CI與C4反應之後能更好地顯露出CI作用於C2的酶活性部位。
C2:C2雖然也是CI的底物,但CI先在C4作用之後明顯增強了與C2的相互作用。C2在Mg2 存在下被CI裂解為兩個片段C2a和C2b。當C4b與C2a結合成C4b2b(簡寫成C42)即為經典途徑的C3轉化酶。
C3:C3被C3轉化酶裂解在C3a和C3b兩個片段,分子內部的疏酯基(-S-CO-)外露,成為不穩定的結合部位。硫酯基經加水分解,成為-SH和-COOH也可與細菌或細胞表面的-NH2和-OH反應而共價結合。因此,C3b通過不穩定的結合部位,結合到抗原抗體復合物上或結合到C42激活C3所在部位附近的微生物、高分子物質及細胞膜上。這點,對於介導調理作用和免疫粘附作用具有重要意義。C3b的另一端是個穩定的結合部位。C3b通過此部位與具有C3b受體的細胞相結合。C3b可被I因子滅活。C3a留在液相中,具有過敏毒素活性,可被羥肽酶B滅活。
(三)膜攻擊階段
C5轉化酶裂解C5後,繼而作用於後續的其他補體成分,最終導致細胞受損、細胞裂解的階段。
C5:C5轉化酶裂解C5產生出C5a和C5b兩個片段。C5a游離於液相中,具有過敏毒素活性和趨化活性。C5b可吸附於鄰近的細胞表面,但其活性極不穩定,易於衰變成C5bi。
C6-C9:C5b雖不穩定,當其與C6結合成C56復合物則較為穩定,但此C5b6並無活性。C5b6與C7結合成三分子的復合物C5b67時,較穩定,不易從細胞膜上解離。
C5b67即可吸附於已致敏的細胞膜上,也可吸附在鄰近的,未經致敏的細胞膜上(即未結合有抗體的細胞膜上)。C5b67是使細胞膜受損傷的一個關鍵組分。它與細胞膜結合後,即插入膜的磷脂雙層結構中。
若C5b67未與適當的細胞膜結合,則其中的C5b仍可衰變,失去與細胞膜結合和裂解細胞的活性。
C5b67雖無酶活性,但其分子排列方式有利於吸附C8形成C5678。其中C8是C9的結合部位,因此繼續形成C5-9,即補體的膜攻擊單位,可使細胞膜穿孔受損。
-不C5b、C6、C7結合到細胞膜下是細胞膜仍完整無損;只有在吸附C8之後才出現輕微的損傷,細胞內容物開始滲漏。在結合C9以後才加速細胞膜的損傷過程,因而認為C9是C8的促進因子。
⑶ 補體結合反應的應用
補體結合反應是診斷人、畜傳染病常用的血清學診斷方法之一。本法不僅版可用於診斷傳染病,如鼻權疽、牛肺疫、馬傳染性貧血、乙型腦炎、布氏桿菌病、鉤端螺旋體病、血錐蟲病等,也可用於鑒定病原體,如對馬流行性乙型腦炎病毒的鑒定和口蹄疫病毒的定型等。
⑷ 須補體參與的超敏反應有哪2種內型
分別是Ⅱ型和Ⅲ型超敏反應
Ⅱ型超敏反應是由IgG或IgM類抗體與靶細胞表面抗內原結容合後,在補體、吞噬細胞和NK細胞參與下,引起的以細胞溶解或組織損傷為主的病理性免疫反應。
Ⅲ型超敏反應是由可溶性免疫復合物沉積於局部或全身多處毛細血管基底膜後,通過激活補體,並在多種效應細胞參與下引起的炎症反應和組織損傷。
⑸ 補體與抗原抗體復合物結合後有什麼反應
抗體:抗原進入機體刺激機體,是由機體漿細胞產生的,可與相應的抗原發生特異性的免疫反應,形成抗原抗體復合物。補體:是機體免疫系統的一種獨立的系統,主要是存在於血清,體液及組織細胞表面的特殊蛋白系統,人體有30多種,補體系統的激活須有抗原抗體復合物的參與(經典途徑)。如果說區別最明顯的就是:補體系統是非特異性免疫因素之一,而抗體是特異性免疫因素之一。抗體只能用於一種抗原,而補體可以用於多種抗原。
⑹ 補體的作用途徑
(一)經典途徑的激活物與激活條件:
1.激活物:主要是IC,特別是與抗原結合的IgG、IgM分子。另外,C-反應蛋白、細菌脂多糖(LPS)、髓鞘脂和某些病毒蛋白(如HIV的gp120等)等也可作為激活物。
2.激活條件:每個C1q分子必須與兩個以上Ig分子的Fc段結合;游離的或可溶性抗體不能激活補體。
(二)參與經典途徑的補體成分:
參與經典途徑活化的補體成分依次為:C1、C4、C2和C3、C5~C9
(三)經典途徑活化過程:
1、識別階段;2、活化階段;3、膜攻擊階段(攻膜階段)
二、補體活化的MBL途徑
凝集素激活途徑(MBLpathway)指由血漿中甘露聚糖結合的凝集素(mannanbindinglectin,MBL)直接識別多種病原微生物表面的N-氨基半乳糖或甘露糖,進而依次活化MASP-1、MASP-2、C4、C2、C3,形成和經典途徑相同的C3與C5轉化酶,激活補體級聯酶促反應的活化途徑。MBL激活途徑的主要激活物為表面含有甘露糖基、岩藻糖和N-氨基半乳糖的病原微生物。
三、旁路激活途徑
旁路激活途徑又稱替代激活途徑(alternativepathway)指由B因子、D因子和備解素參與,直接由微生物或外源異物激活C3,形成C3與C5轉化酶,激活補體級聯酶促反應的活化途徑。
三條途徑異同點
經典途徑:激活物是免疫復合物;C3轉化酶和C5轉化酶分別是C4b2a和C4b2a3b;感染一般在後期才能發揮作用
旁路途徑:激活物是細菌、真菌、病毒感染細菌,直接激活C3;C3轉化酶和C5轉化酶分別是C3bBb和C3bBb3b;存在正反饋放大環;無需抗體存在即可激活補體,感染早期發揮作用
MBL途徑:激活物廣泛,病原微生物表面的甘露糖;除識別途徑與經典途徑不同,後續其他途徑都相同;對經典途徑和旁路途徑有交叉促進作用;無需抗體參與激活補體,感染早期發揮作用
⑺ 補體結合試驗有哪5種成分參與反應
補體結合試驗中有5種成分參與反應,分屬於3個系統:
①反應系統,即已知的抗原回(或抗體)答與待測的抗體(或抗原);
②補體系統;
③指示系統,即SRBC與相應溶血素,試驗時常將其預先結合在一起,形成致敏紅細胞。反應系統與指示系統爭奪補體系統,先加入反應系統給其以優先結合補體的機會。
⑻ 補體結合反應的概述
補體結合反應是一種古老的血清學技術,Bordet和Gengou在1901年設計這一試驗,由於有敏感性高回和適應性廣的優點,盡管答操作繁雜,仍被有效地應用。
補體存在於哺乳動物血清中,各種動物比較,豚鼠血清中補體含量最高,成分較全,效價穩定,採取方便,故通常將豚鼠的全血清作為補體。56℃30min可使補體失去活性,稱為「滅能」或「非動」。
補體的作用為能與抗原—抗體復合物結合,但不能與抗原單獨結合,也不易與抗體單獨結合;補體的作用沒有特異性,能與任何一組抗原抗體復合物結合。它能與紅細胞(抗原)和溶血素(抗體)的復合物結合,引起紅細胞破壞(溶血),也能與細菌、病毒成分及其相應抗體的復合物結合。
溶血反應
將紅細胞多次注射於動物(如將綿羊紅細胞多次免疫家兔)可使之產生相應的抗體(溶血素),這種抗體與紅細胞結合,若有補體存在時,則紅細胞被溶解,這種現象稱為溶血反應。紅細胞和溶血素被稱為溶血系統,常在補體結合反應中用作測定有無補體游離存在的指示劑。
⑼ 補體系統可通過哪些方式引起炎症反應
答:來補體系統可自通過以下方式介導炎症反應,1、激肽樣作用:C2a能增加血管通透性,引起 炎症性充血;2、過敏毒素作用:C3a、C4a、C5a 可使肥大細胞、嗜鹼性粒細胞脫顆粒,釋 放組胺等介質,引起炎症性充血、水腫;3、趨化作用:C3a、C5a 能吸引中性粒細胞和單核 巨噬細胞等向炎症部位聚集,引起炎性細胞侵潤。