平末端連接

1. DNA連接酶在連接平末端時，對連接的2個平末端有什麼要求（需要鹼基相同且序列相反嗎）

平末端是不配對的
但大多數情況下平末端要經過修飾,成為粘性末端,這樣就可以配對了,

2. 不同的平末端能連接起來嗎，

平末端是不配對的
但大多數情況下平末端要經過修飾，成為粘性末端，這樣就可以配對了，這才能連接起來！

3. 平末端能用DNA連接酶連嗎

可以的。
DNA連接酶分為兩類，一類是E。coli DNA連接酶，只能連接黏性末端；一類是T4 DNA連接酶，既能連接黏性末端，又能連接平末端，但連接平末端之間的效率比較低。

4. 急！平末端連接問題

你用的是T4連接酶吧？
平末端連接，一定要用大量的目的片段去競爭載體自連，一般要保證你的片段和你的載體的摩爾數目之比要達到8：1以上才能達到比較高的連接效率。

10微升體系中，一般T4連接酶都是用0.5微升的。然後你按照10：1摩爾比加入你的片段和載體就行了，用水補足體積。

此外，還有一點，平末端連接失敗的主要原因是載體自連很嚴重，你可以用磷酸酶處理載體，將載體去磷酸化，也就是去除載體末端的磷酸集團，這樣可以大大降低載體自連概率，增加鏈接成功率。

5. 連接平末端的連接酶叫什麼

DNA連接酶
平末端也可以用DNA連接酶連接，不過效率很低，連接條件需要摸索，一般加入更大量的連接酶還可以加入PEG作為凝聚劑
常用的平末端DNA片段連接法，主要有同聚物加尾法、銜接物連接法及接頭連接法。

6. 平末端鏈接，測序後，順序經常是反的，怎麼避免

這個平末端鏈接，正反都能有，這個不能避免的，但是可以在測序判斷反正。PCR擴增，一端採用載體上的通用引物，另一端採用目的基因上結合的引物，PCR之後根據條帶大小就可以看出來了。

7. 平末端連接是否有要求

平末端是不配對的
但大多數情況下平末端要經過修飾，成為粘性末端，這樣就可以配對了，

8. 平末端如何連接

可使用人工關節法。

其發展於1976年。首先，採用化學方法合成具有一定限制性內切酶識別位點的序列源序列，通過T4－DNA連接酶連接到兩種待連接片段的平端，然後通過這種限制性內切酶處理產生粘端，實現體外重組。

(8)平末端連接擴展閱讀：

提高平末端連接效率的措施

1、提高t4dna連接酶的濃度。

2、增加DNA片段的濃度。

3、降低ATP濃度，增強連接子與DNA的結合。

4、多胺化合物的加入，如亞精胺，減少了DNA的靜電排斥。

5、加入聚乙二醇（PEG）、強水合物、三氯化鈷等濃縮劑。

E、coli－DNA連接酶只能連接dsDNA片段的互補粘端，不能連接dsDNA片段的平端。T4－DNA連接酶不僅可以「縫合」雙鏈DNA片段的互補粘端，還可以「縫合」雙鏈DNA片段的平端，但連接平端的效率相對較低。

9. 想知道E·coli DNA連接酶為什麼不能連接平末端

EcoRI限制酶能識別GAATTC序列，並在G-A之間切割產生黏性末端；
AluⅠ限制酶能識別AGCT序列並在G-C之間切割產生平口末端。
E·coliDNA連接酶只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間連接起來，不能連接平末端，
T4DNA連接酶既可以連接黏性末端，又可以連接平末端，但連接平末端的效率較低。
看到了嗎 問題其實就是答案，這就是一種酶一個作用的酶特點，或者說沒有為什麼，就像平頭螺絲刀只能針對一字螺絲一樣，當然，用小刀或小勺也可以，但效率更低。

10. 黏性末端與平末端能連接嗎

不能，因為黏性末端是有突出部分的，而平末端沒有，他們無法發生鹼基互補配對。所以，不能連接。