平末端连接

1. DNA连接酶在连接平末端时，对连接的2个平末端有什么要求（需要碱基相同且序列相反吗）

平末端是不配对的
但大多数情况下平末端要经过修饰,成为粘性末端,这样就可以配对了,

2. 不同的平末端能连接起来吗，

平末端是不配对的
但大多数情况下平末端要经过修饰，成为粘性末端，这样就可以配对了，这才能连接起来！

3. 平末端能用DNA连接酶连吗

可以的。
DNA连接酶分为两类，一类是E。coli DNA连接酶，只能连接黏性末端；一类是T4 DNA连接酶，既能连接黏性末端，又能连接平末端，但连接平末端之间的效率比较低。

4. 急！平末端连接问题

你用的是T4连接酶吧？
平末端连接，一定要用大量的目的片段去竞争载体自连，一般要保证你的片段和你的载体的摩尔数目之比要达到8：1以上才能达到比较高的连接效率。

10微升体系中，一般T4连接酶都是用0.5微升的。然后你按照10：1摩尔比加入你的片段和载体就行了，用水补足体积。

此外，还有一点，平末端连接失败的主要原因是载体自连很严重，你可以用磷酸酶处理载体，将载体去磷酸化，也就是去除载体末端的磷酸集团，这样可以大大降低载体自连概率，增加链接成功率。

5. 连接平末端的连接酶叫什么

DNA连接酶
平末端也可以用DNA连接酶连接，不过效率很低，连接条件需要摸索，一般加入更大量的连接酶还可以加入PEG作为凝聚剂
常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。

6. 平末端链接，测序后，顺序经常是反的，怎么避免

这个平末端链接，正反都能有，这个不能避免的，但是可以在测序判断反正。PCR扩增，一端采用载体上的通用引物，另一端采用目的基因上结合的引物，PCR之后根据条带大小就可以看出来了。

7. 平末端连接是否有要求

平末端是不配对的
但大多数情况下平末端要经过修饰，成为粘性末端，这样就可以配对了，

8. 平末端如何连接

可使用人工关节法。

其发展于1976年。首先，采用化学方法合成具有一定限制性内切酶识别位点的序列源序列，通过T4－DNA连接酶连接到两种待连接片段的平端，然后通过这种限制性内切酶处理产生粘端，实现体外重组。

(8)平末端连接扩展阅读：

提高平末端连接效率的措施

1、提高t4dna连接酶的浓度。

2、增加DNA片段的浓度。

3、降低ATP浓度，增强连接子与DNA的结合。

4、多胺化合物的加入，如亚精胺，减少了DNA的静电排斥。

5、加入聚乙二醇（PEG）、强水合物、三氯化钴等浓缩剂。

E、coli－DNA连接酶只能连接dsDNA片段的互补粘端，不能连接dsDNA片段的平端。T4－DNA连接酶不仅可以“缝合”双链DNA片段的互补粘端，还可以“缝合”双链DNA片段的平端，但连接平端的效率相对较低。

9. 想知道E·coli DNA连接酶为什么不能连接平末端

EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，并在G-A之间切割产生黏性末端；
AluⅠ限制酶能识别AGCT序列并在G-C之间切割产生平口末端。
E·coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，不能连接平末端，
T4DNA连接酶既可以连接黏性末端，又可以连接平末端，但连接平末端的效率较低。
看到了吗 问题其实就是答案，这就是一种酶一个作用的酶特点，或者说没有为什么，就像平头螺丝刀只能针对一字螺丝一样，当然，用小刀或小勺也可以，但效率更低。

10. 黏性末端与平末端能连接吗

不能，因为黏性末端是有突出部分的，而平末端没有，他们无法发生碱基互补配对。所以，不能连接。