pcr连接器

⑴ 大唐无双登陆出现链接PCR服务器超时是怎么回事

是大唐无双在维护，每周二早上八点是固定的维护时间，没事去看看论坛上面的维护公告，有维护内容什么的，对以后游戏比较有帮助！！！望采纳~

⑵ PCR的硬件

配套齐全，功能完善，适用性强PLC发展到今天，已经形成了大、中、小各种规专模的系列化产品属，并且已经标准化、系列化、模块化，配备有品种齐全的各种硬件装置供用户选用，用户能灵活方便地进行系统配置，组成不同功能、不同规模的系统。PLC的安装接线也很方便，一般用接线端子连接外部接线。PLC有较强的带负载能力，可直接驱动一般的电磁阀和交流接触器，可以用于各种规模的工业控制场合。除了逻辑处理功能以外，现代PLC大多具有完善的数据运算能力，可用于各种数字控制领域。近年来PLC的功能单元大量涌现，使PLC渗透到了位置控制、温度控制、CNC等各种工业控制中。加上PLC通信能力的增强及人机界面技术的发展，使用PLC组成各种控制系统变得非常容易。 易学易用，深受工程技术人员欢迎

⑶ PCR-SSCP原理和操作步骤

原理：PCR-SSCP是1989年日本Orita等创建的筛查突变的新技术。它是一种简单、快速、经济的点突变筛查手段。PCR-SSCP技术的基本原理是PCR扩增后的DNA片段经变性成单链DNA，单链DNA在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时形成不同的立体构象，其构象直接影响泳动速率，相同长度的 DNA单链其核苷酸顺序仅有单个碱基的差别，就可以产生立体构象的不同，造成泳动速率的不同，产生不同的泳动带。PCR扩增后的DNA片段经变性成单链后在不含有变性剂的中性胶中电泳，与正常比较出现泳动带的变位即可推测存在碱基置换。其碱基置换的性质必须经过DNA测序才能确定。因此PCR-SSCP检测是测序之前突变筛查的常用手段。

为了便于观察分析结果，PCR扩增体系中常加入a-32P dNTP标记PCR产物，电泳后放射自显影观察泳动带的位置。目前也常用银染法来染色聚丙烯酰胺凝胶上的DNA泳动带，此方法可避免同位素的污染及对操作者的辐射损伤，但其灵敏度不如用同位素标记。

单链DNA片段的立体构象主要与碱基序列相关，但也受到其他条件的影响。因此，PCR-SSCP技术的关键在于电泳时的诸多条件，如凝胶的组成、电泳的温度、离子浓度以及影响分子内相互作用的其他溶质等。

PCR-SSCP的缺点是存在假阴性和假阳性，一般对长度不超过300bp的待测片段的检出率为70~80%。
步骤
1．PCR反应（同前）

PCR产物经琼脂糖电泳确认。

2．PCR反应结束后，取5μl扩增产物加10μl甲酰胺上样缓冲液混匀，98℃ 变性10分钟，迅速冰浴。

3．非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

3.1 制备50ml 6%非变性聚丙烯酰胺凝胶，加 TEMED 25μl、10%过硫酸铵250μl，混匀后灌胶，插入加样梳子。待胶完全聚合后，拔出加样梳子，安装电泳装置，加入1´TBE电泳缓冲液，缓冲液应高于加样孔上缘，用注射器吸取缓冲液冲净加样孔。

3.2 取已变性的5μl PCR扩增产物加到点样孔中，以200V/cm电泳 4~5小时。

3.3 拆下电泳装置，取出聚丙烯酰胺凝胶，放到一个塑料盘内，用蒸馏水冲洗1~2遍。

3.4 倒入固定液，固定 8~10分钟。

3.5 用蒸馏水冲洗1~2遍；倒入银染液，银染10~12分钟。

3.6 用蒸馏水冲洗若干遍；倒入显色液，显色至出现清晰的银染带。

3.7 用蒸馏水浸泡聚丙烯酰胺凝胶，观察PCR-SSCP结果。

⑷ 什么是PCR技术

聚合酶链来式扩增反应自。
扩增DNA用的。用两个引物一个模版可以复制一段DNA。
建议参考《分子克隆实验指南》
PCR诊断技术又叫多聚酶链式反应技术，它采用分子技术模拟核酸在体内的复制，从而判定疾病病原的种类，所以从本质上来说，这是一种实验室诊断方法。目前省内一些科研和检测机构，如山东省农科院、山东农业大学以及山东省兽医总站都已经熟练掌握了这项技术。
以往给动物治病，兽医都是采用看闻问摸的方法，这就要等到动物表现出明显的症状，才能初步判定疾病的类型，有时病症复杂了，还得经过很长一段时间的治疗性诊断，不仅错过了治疗的最佳时间，还会造成饲料和药品的浪费。甚至还会出现误诊。而PCR技术就不同了，它不需要观察动物的外观表现，所以无论是在潜伏期还是爆发期，只要对动物的相应器官进行检测，在两个小时内就能准确判定出畜禽疾病的原因和种类，这就意味着能够快速治愈爆发的疾病。另外，这项技术也能作为确定某些疾病流行的权威依据。特别是目前其他各种技术都很难确诊的病毒病，通过它就可以非常直观的得出结论。

⑸ PCR与PCRSSP的区别

1. 要有紧连PCR实验室的高压灭菌锅。
2. PCR实验室内每个房间的所有进、出风口均需加装高效过滤器。版
3. 标本处理间必权须配备A2生物安全柜和通风橱并有外连，外连出口需加高效过滤膜。
4. PCR实验室的压力梯度，从高到低单一流向：试剂制备区--标本制备区--扩增区--产物分析区，建议调整为：试剂制备区+10pa＞标本制备区0pa＞扩增区—10pa＞产物分析区—15pa～—20pa。缓冲间压力梯度为 试剂制备区—10pa、标本制备区—10pa、扩增区—5pa、产物分析区—10pa。
5. 外走廊内距离标本制备区的门最近的地方加装一个水池（手卫生用），并放一个半截柜（用于存放和穿防护服等）；标本制备区实验室内有两个水池（一个倾倒废液，一个用于手卫生），此区的缓冲间加装一个水池（用于脱防护服时手卫生）。
6.建议紧邻PCR实验室洁净区设置厕所、淋浴房和休息间。

⑹ PCR仪器的使用方法

1目的 </B>保证GeneAmp 7000型荧光定量PCR仪的正常使用。 2 该SOP变动程序 </B>本文件的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报经室技术负责人，由季度组长会议决定。如通过则公布实行。 3 适用范围 </B>GeneAmp 7000型荧光定量PCR仪。 4 使用方法 </B>⑴依次打开电脑显示器和电脑主机电源开关，进入Windows 2000界面。 ⑵接着打开PCR仪电源开关，预热5分钟。 ⑶按需要在电脑上设定一个新的运行版面和程序。 ⑷推开滑门，将样品放入样品槽内，关上仪器滑门。 ⑸运行程序，在反应结束后按Save键储存实验结果。 ⑹关闭PCR仪电源开关。 ⑺分析实验结果；发放临床报告。 5 注意事项 </B>⑴仪器应放置在水平坚固的平台上，外界电源系统电压要匹配，并要求有良好的接地线。 ⑵环境温度保持在23℃左右，湿度保持在60％左右。 ⑶仪器应配备功率≥3000W的稳压器。 ⑷仪器应定期清洁维护。 ⑸仪器使用时应严格遵守上述使用步骤。 6 维护方法 </B>6.1微软Windows 2000操作系统的维护 </B>硬盘驱动器每月29日运行一次碎片清除程序，使用Norton Utilities或类似软件。现以Norton为例： ①放入Norton Utilities光盘，运行安装（Setup）文件。 ②安装完后取出Norton Utilities光盘，重新启动计算机 ③运行Norton Utilities软件，并启动其清理碎片/优化程序。 ④运行完成后，检查以确信无严重错误记录，退出Norton Utilities。 ⑤以后每次运行Norton Utilities软件中的清理碎片/优化程序就行了。 6.2 7000 PCR扩增仪的维护 </B>1.样品槽的清洁 样品槽每月29日进行一次清洁，如出现样品槽污染情况则随时清洁。 操作方法： ①运行25℃HOLD程序使样品槽温度达到室温。关闭仪器，等待10分钟。 ②从样品槽移去样品架。 ③在样品槽中加入少量95％乙醇，用棉签擦洗反应孔。 ④用干棉签吸干乙醇。 ⑤向里推动滑门，锁住，使样品槽升温到50℃，以蒸发掉多余的乙醇。 2.热盖的清洁 热盖每月29日进行一次清洁，如有需要随时进行。 ①运行25℃HOLD程序使样品槽温度达到室温。关闭仪器，等待10分钟。 ②逆时针旋转GeneAmp 7000光源检测器顶部旋钮。向后推GeneAmp 7000光源检测器至滑轨距离的大约1/3处。 ③GeneAmp 7000光源检测器滑轨上有缺口。从这些缺口垂直抬起GeneAmp 7000光源检测器，小心侧放于仪器顶盖上。不要从仪器取走热盖。 ④用湿润的镜头纸清洁加热盖，待干。 ⑤将GeneAmp 7000光源检测器重新安装回滑轨。 6.3 GeneAmp 7000光路系统的维护 </B>1.调准ROI参照条 调准ROI参照条在仪器更换卤素灯、仪器定期校准或仪器维修后进行。不得由一般实验人员进行该项操作。 ①推开滑门，在样品槽中放入荧光检测板。 ②GeneAmp 7000仪器滑门向前滑移盖住样品槽，并关紧。 ③从Start菜单或桌面点选运行GeneAmp 7000 SDS管理软件。 ④积分时间从512ms开始，用位置调整点，调节ROI的高度与右边线。 ⑤逐渐增加积分时间，直到可以看到至少四个块（约4096ms）。 ⑥调整最左侧位置调整点。 ⑦减少积分时间到1024ms，调整上方与底部的位置调整点。 ⑧减少积分时间以便最右侧块可见但未饱和（约512ms），调节最右侧位置调整点。如有需要用右上角拖动点调整图象的倾斜度（以左上角为中心旋转）。 ⑨调节后的参照条宽度必须在ROI参照块间有小空隙。 2.校正ROI光路 ROI光路校正每月29日进行一次，以便确信结果仍然是优化的。 ①推开滑门，在样品槽中放入荧光检测板。 ②GeneAmp 7000仪器滑门向前滑移盖住样品槽，并关紧。 ③从Start菜单或桌面点选运行GeneAmp 7000 SDS管理软件。 ④点选Show ROI复选框。每个样品孔周围出现一蓝色椭圆圈。 ⑤点选Show Saturation复选框。 ⑥设定积分时间为1024ms；打开卤素灯和光闸。 ⑦点击LIVE按钮获取图象，然后在任何地方左击停止。获取中等程度未饱和图象（无红色图象）。 ⑧从Edit菜单中选择Calibrate ROIs每个孔都会选取合适的ROI，确定96孔都被蓝色椭圆圈正确界定。 ⑨图象太亮太暗都会出现错误信息，相应增加或减少积分时间，并重复上述第8步直到无错误信息出现。 ⑩检查孔ROI位置，所有孔信息都应包含在96个ROI椭圆圈中。如果没有，重复8和9步。 3.检查样品槽的荧光污染 检查样品槽的荧光污染每月29日进行一次，如有需要随时进行。 ①开启GeneAmp 7000型荧光定量PCR仪电源。 ②从Start菜单或桌面点选运行GeneAmp 7000 SDS管理软件。 ③从样品槽中移去反应板。GeneAmp 7000仪器滑门向前滑移盖住样品槽，并关紧。 ④单击New Document建立一个新的GeneAmp 7000文件 ⑤点击instrument中的catibrate显示ROI inspector窗口 ⑥把Exposure Time调到最大，把Capture image From调到最敏感的FiterB点,单击Snapshot获取图象。 ⑦减少积分时间，改变Capture image From中的A，B，C，D单击Snapshot 观察96孔中背景荧光。如孔有显著荧光则表示该孔存在荧光污染。 ⑧按照样品槽的清洁程序清洗样品槽。 4.更换卤素灯 仪器使用大约2000小时后应更换卤素灯。 ①关闭仪器，冷却15分钟。 ②将样品板放入仪器样品槽，关闭滑门。在仪器的顶部向上打开灯舱门。 ③拧下固定灯罩的螺丝，将灯罩向前滑移，使其从设备上取下。 ④将旧灯泡向前滑移，使其从夹状支架上取下，并将灯泡从灯座上拔下。 ⑤把新灯泡尾部的插杆插入灯座上的插孔，使二者连接起来。 ⑥使灯的长轴与仪器前向平行（即竖直于地面），将新灯泡滑回灯位。 ⑦在灯舱门处于打开状态下，打开仪器，确证在仪器运行时灯也能打开。 ⑧盖上灯罩，拧紧螺丝，关上灯舱门。 ⑨若新卤素灯不工作，GeneAmp 7000电源保险丝可能有问题。 7 校准 </B>GeneAmp 7000型荧光定量PCR仪为复杂精密仪器，其校准工作需由专业工程师进行。除与仪器厂家达成协议定期校准以外，以实验判断仪器校准状态也可为何时进行仪器校准提供信息。 ⑴通过对室内质控图的分析，我们可以及时发现系统误差的出现。经过分析排除了试剂和人员误差后，应怀疑是否仪器出现了检测偏差需要校准。此时进行仪器状态效验实验确定是否需要进行仪器校准。 ⑵仪器状态效验试验 ①使用标准化试剂作为效验试剂。 ②在仪器处于校准状态下，由固定人员用标准化试剂对102、103、104、106标准品进行扩增实验。该实验在两个月内应进行20次。分别计算标准曲线的斜率、截距、相关性的控制限。 ③每年6月、12月由固定人员进行上述实验，观察标准曲线的三个参数是否处在控制范围和102标准品是否检出。 ④当102标准品未检出、标准曲线的三个参数超出控制范围或仅出现后者时，先排除实验的人员、试剂因素，再重复实验。如结果依然，联系厂家立即进行仪器校准。 ⑤当仅有102标准品未检出时，检查实验全过程。再次上机检测102标准品 两枚。仍未检出联系厂家进行仪器校准。 ⑥仪器经过校准后，重复该实验。结果归入仪器档案。标本前处理标准操作程序 </B>1 目的 </B>保证标本处理标准化、规范化，使不规范操作因素对实验结果造成的影响减至最小。 2 该SOP变动程序 </B>本文件的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报经室负责人决定。如通过则公布实行。 3 适用待处理标本范围 临床基因扩增实验室现行检测项目。 4 标准操作程序 4.1 DNA血清类（例如HBV） </B>⑴双手戴上手套，从冰箱取出标本，将验单和试管依次编号，收起验单，弃去手套。 ⑵双手换上新手套，用镊子(夹取灭菌物品专用)取出1.5ml离心管，对应标本编号，置于离心管架上。 ⑶将移液器调到50

⑺ PCR实验室主要仪器设备和耗材清单

PCR实验室可分为样品制备、核酸扩散、产物分析3大区域，每个区域所用的设备不同，下面就给大家详细介绍一下PCR实验室每个区域都需要什么设备？

样品制备区：

生物安全柜 ：防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散

样本低温冰箱：零下20摄氏度，-80℃ 保存样本及DNA

高速台式冷冻离心机：收集微生物菌体、细胞碎片以及其他沉淀物。 有些样品由于在常温下不太稳定，需要低温环境

水浴锅或者金属浴：用于DNA杂交过程中水浴控温

移液器：准确量取特定体积溶液

紫外灯或者消毒车：空间环境消毒

混匀仪：移取样本前需要混匀

超净工作台：涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成

低温摇床：用于大肠杆菌和酵母菌的振荡培养

磁力搅拌器：加速溶解固体内容物

核酸扩散区：

基因扩增仪：基因检测DNA/RNA扩增

荧光定量PCR仪：核酸定量分析

核酸提取仪：样品DNA/RNA提取

移液器：准确量取特定体积溶液

紫外灯或者消毒车：空间环境消毒

超净工作台：涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成

纯水装置：用于PCR,DNA测序需要超纯水

产物分析区：

电泳仪：水平电泳用于核酸DNA/RNA检测，垂直电泳用于蛋白检测，转印电泳用于将蛋白转移到膜上做weatern检测

凝胶成像系统/紫外检测仪：用于核酸琼脂电泳和蛋白聚丙酰胺的观察和拍照；紫外分析仪用于染色后核酸琼脂电泳胶观察，不能连接电脑

电炉：电泳琼脂凝胶加热融化

⑻ pcr适配器是什么东西

适配器是两个物体中间用来连接的一个产品，然后使用适配器的话，可以将两个不同的产品连接在一起使用。他就起到这么一个功能。

⑼ 什么是PCR

PCR是聚合酶链式（Polymerase Chain Reaction）反应的简称，是一种将几个或几十个拷贝数DNA片段扩增至上百万份拷贝的方法，这是迄今为止最为重要的技术之一。PCR技术的影响不仅仅局限于生物科学领域，几乎人人都可以感受到PCR所带来的改变，在亲子鉴定以及犯罪调查中PCR技术便有广泛应用。